胃癌是全球常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年全球新確診病例超過(guò)100萬(wàn)。能量代謝的重新編程和免疫逃避是癌癥的兩個(gè)新興標(biāo)志。乳酸代謝中的關(guān)鍵酶——乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)常以LDHA和LDHB兩種不同的亞型存在，LDHA負(fù)責(zé)丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸和NAD+，而LDHB負(fù)責(zé)將乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸，促進(jìn)氧化代謝。在腫瘤細(xì)胞中，即使在氧氣充足的情況下，丙酮酸也易被LDHA催化成乳酸，稱為Warburg效應(yīng)，也稱為有氧糖酵解。增加Warburg效應(yīng)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，通過(guò)合成代謝過(guò)程避免細(xì)胞凋亡。值得注意的是，產(chǎn)生的乳酸會(huì)導(dǎo)致酸性腫瘤微環(huán)境的形成，這種低pH環(huán)境可影響腫瘤免疫監(jiān)測(cè)的各個(gè)部分，以驅(qū)動(dòng)免疫逃逸，因此，有必要探究LDH表達(dá)在胃癌中的臨床價(jià)值以及對(duì)免疫微環(huán)境可能產(chǎn)生的影響。雖然，目前已有大量的體外研究關(guān)注LDHA在胃癌中的調(diào)控作用，包括其上下游的靶向結(jié)合關(guān)系，以及對(duì)糖酵解的影響，但鮮有研究關(guān)注LDHB在胃癌中的作用以及預(yù)后價(jià)值。

在酸性環(huán)境中的腫瘤代謝重編程與PD-L1等相關(guān)的免疫逃逸機(jī)制已被證明在胃癌中具有重要作用。因此，本實(shí)驗(yàn)著重探討導(dǎo)致腫瘤酸性環(huán)境關(guān)鍵酶的兩種亞型對(duì)胃癌的臨床價(jià)值以及對(duì)腫瘤免疫微環(huán)境的影響。

乳酸生成的增加和H+離子的積累，最終導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境的酸化，目前相關(guān)研究已證明腫瘤組織中酸性環(huán)境與免疫反應(yīng)之間存在密切聯(lián)系。大多數(shù)情況下，酸性環(huán)境導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的活性下調(diào)，而促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和骨髓源性抑制細(xì)胞的招募，從而刺激免疫抑制。另外，相關(guān)研究支持LDH在腫瘤進(jìn)展中的作用，如在C57BL/6小鼠胰腺癌模型成瘤實(shí)驗(yàn)中，敲除LDHA表達(dá)后腫瘤大小小于對(duì)照組；在相同的模型中，LDHA敲低的腫瘤中NK細(xì)胞表現(xiàn)出更高的活性。

與此同時(shí)，黑色素瘤中LDH相關(guān)的乳酸積累被證明可以抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的監(jiān)測(cè)作用，但有趣的是其抑制作用被認(rèn)為涉及乳酸誘導(dǎo)的T細(xì)胞和NK細(xì)胞中NFAT的下調(diào)，從而減少了IFNγ的產(chǎn)生。該結(jié)論提示，LDH活化可能在不同環(huán)境下同時(shí)具有促炎和抗炎作用。目前，LDHA在胃癌中表達(dá)的研究報(bào)道較多，如mTOR/PKM2和STAT3/C-Myc信號(hào)通路可降低LDHA的表達(dá)，并調(diào)節(jié)其能量代謝和腫瘤微環(huán)境。且相關(guān)臨床研究結(jié)果亦表明，LDH的水平對(duì)胃癌患者預(yù)后有著較強(qiáng)的預(yù)測(cè)價(jià)值，檢測(cè)化療前LDH水平也可預(yù)測(cè)中晚期胃癌患者姑息性化療預(yù)后。同以往文獻(xiàn)報(bào)道一致，本實(shí)驗(yàn)亦認(rèn)為L(zhǎng)DHA與患者預(yù)后密切相關(guān)，并且在OS中有著較好的獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。另外本實(shí)驗(yàn)確定了LDHA表達(dá)與Th2細(xì)胞、NK CD56dim細(xì)胞、aDC細(xì)胞、Th1細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、細(xì)胞毒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的含量呈正相關(guān)；與NK CD56bright

細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、pDC細(xì)胞、B細(xì)胞、肥大細(xì)胞、Tem細(xì)胞、Tcm細(xì)胞、TFH細(xì)胞以及NK細(xì)胞的含量呈負(fù)相關(guān)。這些結(jié)果也可為我們未來(lái)在LDH與免疫逃逸的基礎(chǔ)研究中提新思路。另外，不同LDHA表達(dá)的胃癌患者，其DFS結(jié)局差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但隨后本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LDHB是胃癌患者DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其結(jié)果可作為L(zhǎng)DHA的補(bǔ)充。遺憾的是，關(guān)于LDHB對(duì)胃癌組織中免疫微環(huán)境和預(yù)后價(jià)值的研究較少。但本實(shí)驗(yàn)提供了該亞型對(duì)胃癌患者DFS的預(yù)后價(jià)值，并且揭示了LDHB表達(dá)對(duì)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)豐度的影響，包括嗜酸性粒細(xì)胞、pDC細(xì)胞、輔助T細(xì)胞、Tem細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Th2細(xì)胞。這些結(jié)果提示，LDHB的表達(dá)可能同LDHA一樣，也具有一定的免疫調(diào)節(jié)價(jià)值。

目前，雖然胃癌中已有部分標(biāo)志物的預(yù)后作用被深入研究，如SPIN1、AXIN2等,但本實(shí)驗(yàn)對(duì)探究胃癌中乳酸代謝關(guān)鍵酶的關(guān)鍵作用提供了新思路。本實(shí)驗(yàn)也存在一定的局限性：(1)根據(jù)美國(guó)公開回顧性數(shù)據(jù)集，LDH的預(yù)后效能可能還需國(guó)內(nèi)病例數(shù)據(jù)進(jìn)行下一步驗(yàn)證。(2)由于該數(shù)據(jù)集缺乏統(tǒng)一的病理分型，未進(jìn)行各病理亞型的分層分析，如傳統(tǒng)病理分型或分子亞型。雖然，ssGSEA算法在生物信息學(xué)領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用，但仍需體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。另外，值得注意的是，本實(shí)驗(yàn)雖然提示LDHA及LDHB表達(dá)對(duì)免疫細(xì)胞的影響，并且阻斷腫瘤乳酸代謝可能是腫瘤治療的另一種可以嘗試的途徑，但目前針對(duì)免疫細(xì)胞的治療方法具有強(qiáng)毒性，得出的某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果需謹(jǐn)慎應(yīng)用。

Unisense 微電極可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生理學(xué)中組織微環(huán)境的研究。目前使用unisense 微電極研究的論文發(fā)表在Nature、Science 等知名雜志上的數(shù)量已經(jīng)不勝枚舉，可見(jiàn)其應(yīng)用的性價(jià)比很高。