【摘要】：癌癥是當(dāng)前致死率較高的一種疾病，而癌癥的早期診斷能增加患者生還和治愈的比例。電化學(xué)分析具有靈敏度高、分析速度快、儀器簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì)，在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。微電極技術(shù)作為電化學(xué)分析的前沿領(lǐng)域，為人們進(jìn)行細(xì)胞水平超靈敏檢測(cè)癌癥標(biāo)記物、探索癌細(xì)胞的生理現(xiàn)象提供了強(qiáng)有力手段，對(duì)癌癥的早期檢測(cè)和相關(guān)的療效評(píng)估有著重大的意義。開(kāi)發(fā)研制微電極體系的核心是尋找合適的電極材料、設(shè)計(jì)新型的電極結(jié)構(gòu)。石墨烯具有良好的生物相容性、優(yōu)異的物理性能和化學(xué)性能，并能被廣泛用于構(gòu)建各種不同結(jié)構(gòu)、形貌可控的新型多功能電極，因而在電化學(xué)生物傳感器領(lǐng)域掀起了一股研究熱潮。鑒于對(duì)癌癥標(biāo)記物超靈敏、高精確度和快速檢測(cè)的應(yīng)用需求，以及目前國(guó)內(nèi)外在電化學(xué)傳感、微電極技術(shù)和石墨烯功能材料等方面的研究進(jìn)展，我們開(kāi)發(fā)了兩種基于三維多孔石墨烯修飾碳纖維的功能微電極，并構(gòu)建了可用于超靈敏檢測(cè)癌細(xì)胞釋放H_2O_2的電極系統(tǒng)，開(kāi)展其在癌細(xì)胞電化學(xué)檢測(cè)中的基礎(chǔ)應(yīng)用研究。

首先本文提出一種創(chuàng)新的方法，即用離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽([BMIM][BF_4])作為電解液電沉積石墨烯材料。由于離子液體具有較寬的電位窗口，從而能在較負(fù)電位-2 V條件下，實(shí)現(xiàn)三維(3D)多孔石墨烯在活化碳纖維(active carbon fiber，ACF)上的一步電沉積和電化學(xué)還原。[BMIM][BF_4]分子將通過(guò)自身的咪唑環(huán)與石墨烯片層間的陽(yáng)離子-π和π電子對(duì)相互作用吸附在3D多孔石墨烯表面，為后續(xù)納米金屬顆粒的沉積提供成核活性位點(diǎn)并能作為模板調(diào)控粒子形貌。進(jìn)一步在含Pt和Au的前驅(qū)體溶液中電沉積，在3D多孔石墨烯支架表面負(fù)載高密度、均勻分散的雙金屬PtAu納米顆粒。

由于電極上貴金屬納米顆粒與石墨烯之間的協(xié)同作用，使納米復(fù)合微電極在檢測(cè)H_2O_2時(shí)展現(xiàn)出高靈敏度、寬線性范圍、低檢測(cè)限和高選擇性等良好的電化學(xué)傳感性能。此外將微電極用于近細(xì)胞檢測(cè)癌癥標(biāo)記物，測(cè)定活細(xì)胞釋放的H_2O_2的含量。分別對(duì)幾種不同的婦科惡性腫瘤細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231、MCF-7)和宮頸癌細(xì)胞(Hela)進(jìn)行測(cè)試，并與人正常的乳腺上皮細(xì)胞(HBL-100)的檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞釋放的H_2O_2量更多;用抗癌藥物順鉑(DDP)對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行化療降低其細(xì)胞活性，之后再次測(cè)定其釋放H_2O_2量并與抗癌藥物處理前信號(hào)進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)電流信號(hào)也減弱。

根據(jù)這些檢測(cè)信號(hào)的差異可以達(dá)到檢測(cè)癌癥、識(shí)別不同類型癌細(xì)胞和評(píng)估化療療效的目的。在下一項(xiàng)研究工作中，我們采用兩種離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽([BMIM][BF_4])和1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIM][PF_6])混合液作為電解液，在-3 V電位條件下制備3D石墨烯修飾的ACF。利用吸附在石墨烯片層上的離子液體作為摻雜劑，將電極材料在高溫條件下進(jìn)行熱處理，使離子液體中的B、N和P元素同時(shí)摻雜到石墨烯片層中，制備得到多元素共摻雜的3D多孔石墨烯修飾碳纖維微電極。

由于石墨烯的3D多孔結(jié)構(gòu)、較高雜原子摻雜量以及不同摻雜元素之間的協(xié)同作用，電極對(duì)H_2O_2表現(xiàn)出高效的電催化和傳感性能。將微電極BPNF–ERGO/ACF進(jìn)行近細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，分別用于監(jiān)測(cè)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、宮頸癌細(xì)胞(Hela)和人肝癌細(xì)胞(HepG2)釋放H_2O_2的動(dòng)態(tài)過(guò)程。此外也將電極用于原位檢測(cè)人乳腺癌組織在應(yīng)激條件下釋放H_2O_2的含量，對(duì)拓寬電極的應(yīng)用平臺(tái)具有重大的研究意義。