【摘要】：特定序列核酸的檢測在臨床病原體檢測、癌癥早期診斷以及遺傳病確診等方面至關(guān)重要。無標(biāo)記均相電化學(xué)傳感器在低消耗、低成本、易操作、快速檢測和高重復(fù)性等方面具有顯著的優(yōu)勢。我們基于復(fù)合功能核酸分子和超微電極檢測裝置，構(gòu)建了無標(biāo)記均相電化學(xué)核酸傳感器，用于PIK3CA循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)的高特異性檢測。將PIK3CA ctDNA互補(bǔ)序列和G-四聚體脫氧核酶偶聯(lián)，分別作為目標(biāo)識(shí)別元件和信號(hào)轉(zhuǎn)換元件，設(shè)計(jì)了具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的單鏈DNA，其中G-四聚體和ctDNA互補(bǔ)序列通過堿基互補(bǔ)被封閉。當(dāng)目標(biāo)DNA即PIK3CA與其互補(bǔ)序列特異性結(jié)合后會(huì)導(dǎo)致DNA構(gòu)象變化，釋放G-四聚體并發(fā)揮過氧化物酶的活性，催化H2O2和對(duì)苯二酚(HQ)反應(yīng)，產(chǎn)生對(duì)苯醌(BQ)和水。使用碳纖維超微電極微型電化學(xué)裝置對(duì)微升體積樣本中HQ和BQ的氧化還原電流信號(hào)進(jìn)行檢測。結(jié)果表明:氧化還原電流信號(hào)隨目標(biāo)DNA分子濃度變化而變化，檢測限達(dá)20 nM，可有效區(qū)分完全互補(bǔ)序列和單堿基錯(cuò)配序列DNA。此外，在血清摻雜樣本中該傳感器表現(xiàn)出類似的檢測效果。本研究設(shè)計(jì)的電化學(xué)生物傳感器實(shí)現(xiàn)了微升體積內(nèi)ctDNA的高性能檢測，為特定病原體或腫瘤基因的靶向DNA序列檢測提供了一種新思路，在醫(yī)學(xué)診斷和便攜式檢測中具有廣闊的應(yīng)用前景。